Opieka Medyczna
Zdrowie i opieka medyczna

Mutacje WNT1 we wczesnej fazie Osteoporozy i osteogenezy Imperfecta AD 4

Posted in Uncategorized  by admin
April 18th, 2018

Biorąc pod uwagę historię rodzinną dwóch dotkniętych rodzeństwem i negatywne wyniki badań kolagenu fibroblastów, przeprowadzono sekwencjonowanie całego egzonu, jak opisano wcześniej, 8 w próbie zidentyfikowania nowego genu recesywnego dla osteogenezy imperfecta. Warianty zostały zidentyfikowane i przeanalizowane za pomocą wewnętrznego rurociągu opisanego w Dodatku Uzupełniającym. Ostateczny schemat filtrowania wariantów, który skupiał się na rzadkich wariantach recesywnych, wyszczególniono w tabeli S3 w dodatkowym dodatku. Eksperymenty In Vitro i Myszy
Komplementarny DNA (cDNA) kodujący WNT1 wklonowano do ssaczych plazmidów ekspresyjnych i mutacje wprowadzono przy użyciu standardowych technik. Plazmidy transfekowano w komórkach HEK293T, MC3T3 i C57MG, a komórki testowano na aktywację .-kateniny, ekspresję białka WNT1, transkrypcję genu docelowego i różnicowanie. Aby profilować ekspresję Wnt1 in vivo, stosowano ilościowe oznaczenia w czasie rzeczywistym reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR) tkanek z myszy typu dzikiego i prowadzono śledzenie linii z reporterowym szczepem myszy RosamT / mG skrzyżowanym z myszami transgenicznymi Wnt1-Cre, jako poprzednio opisane.9,10 Szczegóły tych eksperymentów zostały opisane w Dodatku Uzupełniającym.
Wyniki
Identyfikacja mutacji WNT1
W Family 1, analiza połączeń mikrosatelitarnych w genach ze stosowaniem DNA od 10 chorych i 6 zdrowych członków rodziny ujawniła przypuszczalny obszar wiązania 25,5 Mb na chromosomie 12 (P = 0,01) (ryc. S3 i S4 w dodatkowym dodatku). Drobne mapowanie i ukierunkowane sekwencjonowanie nowej generacji umożliwiło identyfikację pojedynczego nowego wariantu w WNT1 (p.Cys218Gly), segregującego z fenotypem. Mutacja (c.652T . G) wpływa na pierwszą cysteinę tak zwanego motywu WNT (C- [KR] -CHG- [LIVMT] -SGxC), która jest konserwatywna dla różnych gatunków i 19 znanych ludzkich członków rodziny WNT. 11 Mutacja zastępuje polarną, zawierającą siarkę cysteinę małą, niepolarną glicyną aminokwasową (ryc. S5A w dodatkowym dodatku).
W Family 2, po raz pierwszy wykluczyliśmy mutacje w znanych genach recesywnych dla osteogenezy imperfecta z sekwencjonowaniem Sangera, a następnie przeprowadziliśmy sekwencjonowanie całego eksonu. Analiza rzadkich lub nowych odmian genetycznych ujawniła dwóch potencjalnych kandydatów. Pierwszy był wariantem w COL1A2 (NM_000089.3: c.3200G . A, p.Arg1067His). Jednak ten wariant nie był uważany za przyczynowo-skutkowy, ponieważ ojciec, u którego nie wykryto żadnych dowodów na osteogenezę imperfecta, miał mutację we krwi i fibroblastach, a oba chore dzieci również były heterozygotyczne pod względem tej mutacji. Ponadto, nie oczekuje się, że ten wariant COL1A2 spowoduje ciężki fenotyp imperfekcji osteogenezy u dwóch sióstr z tej rodziny (z których jedna także miała ciężkie nieprawidłowości neurologiczne), ponieważ zmiana aminokwasu znajduje się w obrębie reszty X trypletu kolagenowego GXY, a wyniki badań kolagenu w fibroblastach były prawidłowe
[przypisy: dermatolog warszawa, Laserowe usuwanie blizn, usuwanie blizn laserem ]

Tags: , ,

Komantarze do artykulu sa obecnie zamkniete, popros administratora strony o ich otwarcie jesli chcesz wziasc udzial w dyskusji pod artykulem. Kontakt do administracji w zakladce kontakt.(Mozliwe jest rowniez przeslanie propozycji tematow ktore mozemy uwzglednic w nastepnych naszych artykulach, bedziemy wdzieczni za wasze cenne sugestie i postaramy sie je wykorzystac przy kolejnych wpisach.)

Powiązane tematy z artykułem: dermatolog warszawa Laserowe usuwanie blizn usuwanie blizn laserem